Webinario MEDIA FILL TEST: “Validación de Llenado Aséptico”

El medio a utilizar para efectuar ensayos de validación en condición de anaerobiosis corresponde a Caldo Tioglicolato, ya que de utilizar medio, el proceso de filtración podría verse afectado por su consistencia extendiendo tiempos de proceso y generando intervenciones que no resulten representativas de la operatoria habitual

Es Correcto. Como toda validación de proceso, un Media Fill Test posee pre-requisitos. Entre ellos, se incluye la validación de filtración esterilizante en las condiciones y con los insumos en los cuales se aplica de forma cotidiana y representativa. No es conveniente encarar una validación de llenado aséptico si todos los equipos, áreas, sistemas y procesos accesorios aportan incertidumbre al resultado final del MFT.

Considerando que los insumos provenientes de estufa o autoclave serán utilizados en áreas estériles, su permanencia fuera de los equipos térmicos, debe ser en área de igual clase (Grado A).

Actualmente, el mercado utiliza en su mayoría filtros fabricados con poro nominal. Esto quiere decir que si el objetivo de la validación es emular la operatoria habitual, el filtro a utilizar debe ser representativo. En este mismo sentido, si entendemos que un filtro de poro con tamaño nominal puede tener un porcentaje bajo de poros de diámetro mayor a 0,22 micrones, es lógico considerar que lo más adecuado es evitar su re-utilización.

Correcto, se trata del llamado Test de Promoción de Crecimiento. Este test se realiza para validar la funcionalidad del medio de cultivo tal como fue elaborado para esa corrida de validación en particular. Mediante este test, se demuestra que no existe posibilidad de resultados falsos negativos.

La Esterilidad del medio de cultivo que se encuentra en los viales, se determina en ambos periodos de incubación de MFT. No es necesario realizar nuevas siembras. Por esto es que se indica sacar las muestras de análisis una vez terminado el proceso de incubación.

Si se trata de un área en la cual no se ha realizado anteriormente lotes de MFT utilizando medio TIO, lo recomendable es hacer una tríada inicial (3 corridas) para dar por válida la línea en condición de anaerobiosis. Luego, según indique la autoridad sanitaria nacional, podrá repetir lotes, con cierta periodicidad, para mantenimiento de vigencia. Es importante que dicha repetición responda a la frecuencia de hallazgo de organismos anaerobios, en los controles diarios.

La muestra denominada bioburden se toma únicamente en instancia previa a la filtración. Luego serán muestras para Test de Esterilidad.

En casos de sistemas con monitoreo continuo (calibrados y validados) no sería necesario.

La referencia bibliográfica indica cumplimentar 2 etapas por separado, y que dichas etapas deben realizarse estrictamente en los rangos de temperatura establecidos (20-25°C y 30-35°C). Esto permite que ambos tipos de microorganismos tengan ,el espacio y tiempo necesario, para su desarrollo, sin competir por el medio nutritivo.

En bibliografía nacional e internacional, se indica que el ensayo de validación de TIO siempre es complementario al ensayo de validación con TSB. Uno no reemplaza al otro. Por lo cual, deberían establecer su validación inicial para ambas condiciones (aerobiosis y anaerobiosis) y luego mantener vigente la validación al menos con TSB (siempre que los monitoreos ambientales no indiquen hallazgo de microorganismos anaerobios, en áreas).

El uso de medio tioglicolato promueve de forma diferenciada el crecimiento microbiano de organismos en condición de anaerobiosis. Si consideramos que al efectuar una validación utilizando este medio, nuestro microorganismo de interés es anaerobio, la respuesta sería no. Ahora bien, dado que los microorganismos presentes pueden ser anaerobios facultativos también, el ensayo de validación de TIO siempre es complementario al ensayo de validación con TSB. Uno no reemplaza al otro.

No existe un porcentaje de llenado recomendado. El volumen debe ser tal que permita visualizar un posible crecimiento microbiano en forma de turbidez de medio, pero también que permita la existencia de cámara de aire. Mi recomendación es emplear al envase al 50% de su capacidad.

Si posee una línea de proceso donde existe pre/pos nitrogenado de envases (previo a su cierre), debe cumplimentar la validación con medio TSB en la rutina establecida por bibliografía, y además debe cumplimentar validación con TIO. En este último caso realice una tríada inicial y luego establezca periodicidad en función de hallazgos de microorganismos anaerobios.

Es correcto, esta situación es la ideal. En caso contrario debe justificarse por análisis de riesgos.

El proceso de llenado debe ser realizado inmediatamente posterior al proceso de filtración.
Las buenas prácticas de manufactura no habilitan tiempos de espera en este caso. De existir se debe demostrar que las condiciones son las adecuadas para impedir la contaminación del producto.

No es recomendable, ya que no demuestra que el medio no haya sido adulterado en etapas posteriores.

En ese caso, en primer instancia se debe evaluar cuántas unidades han resultado fallidas e inmediatamente generar el desvío correspondiente para dar inicio a la investigación de fallas. Si fuera una única unidad contaminada y se hallara la causa raíz, es posible aplicar medidas correctivas para repetir un único lote. En este escenario, la validación tendría fecha desde el primero de los 3 lotes exitosos.

Es recomendable realizar al menos una vez en la historia de la línea una triada de validación con medio diferencial (TIO). Asimismo, es fundamental poder demostrar de forma robusta, que la ausencia de resultados ambientales anaerobios se debe a ausencia de microorganismos y no a deficiencia de metodo de deteccion.

Existen una serie de condiciones básicas que cumplimentar para dar por válido un ensayo de validación de llenado aséptico, desde el punto de vista de dosificado:

• Emular los parámetros críticos de máquina en función de los resultados de la evaluación de un peor caso.
• Involucrar en el ensayo de validación al personal de todos los turnos productivos habituales
• Extender el proceso de dosificado la cantidad de horas suficientes tal que se emule el peor caso de llenado (que será el más extenso).
• Respetando la velocidad de máquina habitual, llenar una cantidad de unidades que permita alcanzar las horas indicadas en el ítem anterior
• Emular los tiempos de pausa e intervenciones de personal habituales (en calidad y cantidad).

Es de pensar, que en caso de no alcanzar el mínimo de unidades habituales han sucedido eventos no cotidianos, con lo cual, se pierde representatividad. Por ende, para que un lote cumpla con la simulación del proceso, se deben poder lograr todas las condiciones previamente descritas.

El proceso de validación de llenado aséptico nos permite visualizar el nivel de impacto que posee el conjunto de: área, personal y operatoria, en la calidad microbiológica del producto. Un lote de media fill realizado bajo condiciones de protocolo de validación, puede presentar desvíos puntuales que no se vean necesariamente reflejados en contaminación de unidades. El lote resulta válido, demostrando robustez de proceso. El desvío puntual de la persona, debe ser investigado dentro del sistema de calidad general de la empresa.

La bibliografía de referencia (PIC/S 007-6) refiere empleo de TBS (tryptose Broth Soy) o Caldo Tripteina de Soya.

Considerando que los insumos provenientes de estufa o autoclave serán utilizados en áreas estériles, su permanencia fuera de los equipos térmicos, debe ser en área de igual clase (Grado A).

Durante un proceso de validación de llenado aséptico, cada unidad mantiene riesgo máximo de contaminación hasta el momento en el cual es cerrado de forma hermética. Es decir, que para aquellos procesos que este cierre no pueda efectuarse inmediatamente después de su llenado, los controles y monitoreos deben ser equivalentes a la etapa de dosificado.

Existen en el mercado medios de cultivo irradiados, con certificado de esterilización. Las marcas más conocidas los distribuyen. No es condición obligatoria su utilización, pero es recomendable.
Generar un tratamiento del medio de cultivo que no resulta habitual es riesgoso. Efectuar este tratamiento en áreas de producción aumenta el riesgo. No sería una buena opción.

La muestra para análisis de viabilidad del medio, debe ser obtenida de las unidades al finalizar todo el proceso de validación. Con esto se comprueba que durante ninguna de las etapas transcurridas el medio de cultivo haya sido adulterado, para generar resultados favorables.

El ensayo de hermeticidad es habitual para todos los productos, con lo cual debe realizarse también en la simulación del llenado aséptico. El control de hermeticidad deberá responder a que se emplea en proceso para aprobación/liberación de producto.
En lo referente a monitoreo activo de aire debe ser continuo bajo flujo laminar, y su posición (es decir el punto de toma de muestra) debe estar determinado por análisis de riesgos.

Es correcto. Pero esto también debe ser un control de práctica habitual en el proceso productivo.

Basta con el proceso de incubación al cual son sometidos los viales al finalizar el dosificado. La esterilidad del medio se demuestra al final de la incubación del lote. No resulta necesario re analizar muestras.

El personal que realiza el revisado óptico manual debe contar con el entrenamiento necesario para dicho proceso. Además debe cumplimentar la aptitud oftalmológica y puede ser calificado mediante un ensayo de knapp test específico para media fill.

No es claro, si se trata de una consulta.

Se trata de una situación de mantenimiento de validación. Implica 1 única corrida satisfactoria cada 6 meses, respetando las mismas condiciones de peor caso.

El concepto de trabajo por campaña establece condiciones de uso de área diferenciales según el proceso. Un área diseñada para procesos asépticos, habitualmente se emplea de igual forma, a lo largo del año. A su vez, los ensayos de media fill test deben establecerse bajo un programa de rutina semestral. Si se refiere a campaña de validación, es necesario considerar que se dispongan de los insumos necesarios y por sobre todo de la capacidad de cámara de incubación para respetar las temperaturas y tiempos de cada etapa.

Todo personal designado a trabajar bajo flujo laminar, en procesos de dosificado aséptico, debe contar con participación en al menos un lote anual de media fill tests, con resultado exitoso.

No existe una bibliografía que refiere este dato. Mi recomendación es generar una distribución equidistante con al menos 1 dataloggers en cada nivel de estante (si se tratan de bandejas) o en laterales de pallet. La cantidad irá variando en función de cómo será dispuesto el material para su incubación.

El uso excesivo de medio de cultivo en bajo flujo laminar y entorno aséptico es contraproducente, con lo cual lo recomendable es efectuar monitoreo frente a eventos de intervenciones críticas (ejemplo desarme de bomba dosificadora o máquina) y obligatoriamente, antes de abandonar el área (ya que cada vez que un operador abandona el área esteril para salir, deberá cambiarse con un traje nuevo para re-ingresar). Si esto no sucede, se efectúa un único plaqueo al final de su jornada (al final de cada turno).

Principalmente la presión y el tiempo de proceso, ya que algo que no puede suceder es que pro efecto de presurizar de forma excesiva el reactor o contenedor, se cause una desconexión de mangueras o filtro y esto exponga el medio de cultivo de forma directa al ambiente.

Las buenas prácticas de manufactura indican que el proceso de llenado aséptico debe realizarse inmediatamente posterior a la filtración esterilizante del granel. Uno de los desafíos que plantea un media fill exitoso es validar la operatoria habitual, con foco en el aspecto microbiológico del proceso.

Dependerá de la autoridad sanitaria propia de cada país. En Argentina, el proceso de validación se mantiene vigente con un lote obligatorio, cada 6 meses.